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Microscopie

LE MICROSCOPE -- Mode d'emplois

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  Comment faire les préparations microscopiques

Introduction:

Au lieu d'études livresques qui ne peuvent que vaguement se fixer dans l'esprit, nous proposons à ceux qui désirent acquérir des connaissances l'étude visuelle de l'infiniment petit. De toutes les collections dont s'occupe le chercheur, bien peu peuvent avoir l'intérêt documentaire et scientifique que présente une collection microscopique. L'étonnement sera grand de voir, grâce au microscope et sur des objets infiniment petits, des choses aussi merveilleuses. La vulgarisation des préparations vous permettra de faire des découvertes qui intéresseront grands et petits, et seront d'un précieux concours dans vos études. Pour rendre l'usage du microscope captivant, les préparations trouvées dans le commerce seront d'un grand intérêt. Beaucoup de préparations ne peuvent être faites par l'amateur. Néanmoins, la possibilité de faire soi-même des préparations (dont on ne peut établir la nomenclature en raison de leur variété), vous assure non seulement la distraction, mais également un supplément de culture. L'expérience montre que les débutants qui possèdent un microscope et des préparations achetées toutes faites ne tardent pas à s'en désintéresser. Leur curiosité est vite lassée. Ne connaissant pas les procédés de montage, ils ignorent les innombrables observations qui en découlent. C'est pourquoi nous avons pensé que cet opuscule, qui est le condensé d'un travail consciencieux, serait utile. Les renseignements qu'il contient sont le résultat de travaux pratiques que nous exécutons dans nos laboratoires, et d'indications techniques puisées dans des ouvrages spécialisés. Il serait souhaitable que les jeunes gens de dix à quinze ans, après l'enseignement dispensé par leurs professeurs pendant leurs heures de cours, puissent, entrés à la maison, compléter leurs connaissances par des exercices pratiques d'observations microscopiques.
La meilleure méthode consiste à reproduire sur un cahier les choses vues par reproduction visuelle, ou avec une chambre claire. L'instruction générale ne pourrait qu'y gagner, de même que l'hygiène. En effet, après examen d'une goutte d'eau prélevée dans une mare, on se rendra compte que cette eau est impropre à la consommation. Les multiples organismes vivants que vous observerez vous en fourniront la preuve. Cette observation ancrera dans l'esprit des jeunes la nécessité de l'hygiène. Nous ne nous étendrons pas sur le microscope proprement dit, c'est-à-dire système optique, indice, luminosité, profondeur de champ, grossissement, marche des rayons, mécanique, éclairage, etc. Pour cela, se reporter à des ouvrages spécialisés. Nous ne nous occuperons que de la préparation et du montage des collections.

ATTENTION !!! CERTAINS PRODUITS CITES SONT DANGEREUX ET PEUVENT ETRE  CORROSIFS, TOXIQUES, NOCIFS...

MATÉRIEL DE TRAVAIL

Porte-objet.- Lame de verre destinée à recevoir l'objet. Dimensions courantes: 76 X 26.

Couvre-objet: Verre très mince destiné à recouvrir l'objet. Pour les milieux hydratés, on utilisera des couvre-objets ronds faciles à luter. Dimensions courantes: 18 x 18 ou diam. 18

Agitateur en verre: pour prélever des produits, colorants, baume, etc.
Pipette en verre: pour prélever et déblayer les colorants, l'eau polluée, etc.
Verre de montre: pour bain, lavage, etc.
Tube de verre: pour fixation, coloration, conservation, etc.
Lame à concavité: pour examen des organismes vivants.
Lame à anneau pour examen à l'état frais: goutte pendante, culture de champignons microscopiques.
Aiguille droite: pour dissection et prélèvement.
Aiguille courbe: pour dissection et prélèvement.
Aiguille lancéolée: pour dissection et prélèvement, passer les coupes d'un produit dans un autre.

Scalpel: pour dissection.
Pince Brucelle: pour manipulation des insectes, saisir les couvre-objets, etc.

Lampe à alcool: pour chauffer les porte-objets, faire fondre la gélatine, préparer certaines cristallisations, etc.

Ciseaux: pour découper les fragments de tissu humain ou végétal.

Microtome: pour faire les coupes minces et régulières.
Rasoir à face plane: pour faire les coupes (après usage essuyer la lame avec un linge imbibé d'huile de vaseline pour éviter sa détérioration).
Tournette: pour luter régulièrement.
Pince à linge: pour tenir votre porte-objet et le passer à la flamme.
Pinceau: pour luter et prélever des organismes fragiles, exemple: larves de moustiques, etc.
Moelle de sureau: pour préparer les coupes.
Loupe: pour premier examen.
Filet en soie à bluter: pour pécher et laver des crustacés et des objets plus fins que ci-dessus.
Filets à papillons: pour attraper les insectes qui volent.
Pour explorer les eaux: une simple boîte métallique fixée à une canne qui vous servira de drague. Prélevez la vase du fond, vous récolterez de cette façon une multitude d'objets.

Résumé du matériel de travail à emporter lorsque vous irez à la campagne:
quelques flacons vides, d'autres refermant quelques tampons de cotons hydrophile humectés d'alcool à brûler pour y mettre les insectes !

• un filet à papillons pour capturer les insectes qui voient;
• une pince pour saisir ceux qui piquent ou qui mordent;
• un filet à aquarium pour explorer les mares et les ruisseaux.

• 1° exemple: les doryphores seront pris à la main.
  2° exemple: les araignées à la pince.
  3° exemple: les guêpes, abeilles, les prendre avec le filet à papillons, les assommer, puis les saisir à la pinces.
  4° exemple: les daphnies, écrevisses des ruisseaux, crustacés avec le filet à aquarium.

CONSEILS

Voici les conseils que nous croyons utiles de vous fournir pour guider vos premiers essais:

• Tout le matériel doit être constamment dans un parfait état de propreté. Après usage, nettoyer à fond pipettes et agitateurs suivant le cas avec de l'eau, de l'alcool ou du xylol.
• Microscope: avec un mouchoir en fil usagé, essuyer les lentilles; ne pas démonter les objectifs de peur de déplacer le système optique.
• L'image obtenue par un petit microscope n'est possible que par les rayons lumineux qui traversent l'objet. Le premier traitement à faire subir à l'objet est de le rendre le plus mince possible.
• Placer le microscope dans un endroit bien éclairé, soit près d'une fenêtre ou d'une lampe électrique. A l'aide du miroir placé sous la platine, diriger la lumière vers le système optique.
• Prendre une préparation, la placer sur la table du microscope, la maintenir par les deux valets, baisser le tube au maximum sans pour cela qu'il touche la préparation, observer par l'oculaire, l'œil très près de ce dernier, faire minutieusement la mise au point en levant et baissant le tube
• Lorsque vous aurez fait une préparation, n'oubliez pas de mentionner sur une étiquette que vous collerez sur le bord du porte-objet, vos observations et caractéristiques; sinon, il vous serait difficile, voire même impossible, de reconnaître vos objets.
• Fixation, coloration, etc., variant suivant le volume et la nature de l'objet; la qualité de l'image obtenue dépend en grande partie du soin apporté à la préparation de l'objet.
• Les produits seront employés en petite quantité.
• On aura intérêt, pour les objets ayant un séjour prolongé à faire dans un produit, de boucher le récipient, sans quoi vous auriez la surprise de trouver votre objet à l'air libre, ce qui le rendrait inutilisable.
• Eau: Eau de source. Etant donné le pouvoir dissolvant de l'eau, celle-ci se minéralise en attaquant les terrains: en même temps, elle recueille des matières organiques, minérales et végétales.
  L'eau de pluie est médiocre, souillée par les matières organiques de l'air.
  L'eau du robinet est javellisée.
  En général, pour les préparations qui nous concernent, à défaut d'eau distillée, l'eau filtrée suffira.
  A défaut, faire bouillir de l'eau dans un récipient muni d'un couvercle, recueillir l'eau qui se condense sous le couvercle. Ou bien, dans un récipient muni d'un bec (cafetière, etc.), verser de l'eau jusqu'à l'ouverture inférieure du bec, le récipient fermé hermétiquement. Chauffer de façon que l'eau en ébullition ne laisse échapper la vapeur que par le bec, avec un tube en caoutchouc dont l'une des extrémités sera fixée après le bec et l'autre enfoncée dans une bouteille; la vapeur, en arrivant dans la bouteille se condensera. Boucher et s'en servir au fur et à mesure de vos besoins.
• Lavage: Cette opération, trop souvent négligée, est d'une importance capitale pour éliminer les produits et pour permettre la conservation des préparations.
• Pendant vos manipulations, les tissus animaux et végétaux seront placés dans un milieu liquide, fixateur ou éclaircissant. Ne pas laisser sécher l'objet car il deviendrait inutilisable.
• L'excès de liquide déposé sur un porte-objet sera absorbé par un papier buvard.
• Pour les animaux contractiles, faire une infusion concentrée de tabac; ceci concerne certains animaux aquatiques, vers, etc. Lorsqu'il n'y aura plus réaction de l'objet, on enlèvera avec un buvard tout le liquide possible (ne pas laisser sécher); recouvrir rapidement de picroformol de Bouin, pour fixer en état d'extension.
• Pour les objets trop épais pour être montés directement entre porte-objet et couvre-objet, on montera en cellule. Dans un morceau de bristol ayant la dimension de la lamelle, faire un trou de façon à ce que les bords n'aient pas plus de deux millimètres; coller sur le porte-objet la cellule ainsi préparée, déposer au centre l'objet qui a été au préalable fixé, coloré et passé au liquide glycériné; recouvrir de gélatine glycérinée; luter plusieurs fois. On pourra également monter au baume du Canada, après déshydratation. Ces méthodes seront bonnes pour tous les objets épais. On examine au microscope avec un grossissement faible. Avec un grossissement fort, la totalité de l'objet ne serait pas visible.
• Pour examiner une préparation, commencer par un grossissement faible. Vous aurez une vue d'ensemble. Augmenter le grossissement pour l'examen des détails. Vous obtiendrez un meilleur résultat en combinant un objectif fort à un oculaire faible (que si vous opériez inversement).
• N'oubliez pas, lorsque vous irez en promenade, de vous munir de petits tubes de verre bien bouchés dans lesquels vous pourrez placer vos récoltes, quelques-uns étant remplis d'alcool faible pour les insectes.

Lorsque vos préparations sont terminées, les conserver à plat.

DISSECTION

Il faut opérer avec le plus grand soin; il ne faut pas déchirer mais séparer. Sans cela, on rendrait les objets méconnaissables. L'essentiel est d'éviter d'écraser ou de déformer l'organe ou la matière afin de ne pas altérer sa structure. Il y a plusieurs façons d'opérer. La plus simple consiste à faire des coupes à main levée, soit telle quelle ou durcie dans l'alcool. On se servira d'un rasoir ou d'une aiguille lancéolée.
Ne seront utilisables que les tranches ou les organes très minces. Leur manipulation sera délicate. Pour transporter ces objets de liquide en liquide, on se servira suivant le cas de pinceau, de baguettes de verre ou de la pincette. Eviter l'emploi des aiguilles d'acier qui les déchirent.

MICROTOME

Instrument destiné à découper dans les tissus animaux ou végétaux de minces tranches pour étudier au microscope. Le microtome à main se compose d'un cylindre creux qui tourne au moyen d'un pas de vis dans un autre. On coupe avec un rasoir à face plane et l'on obtient l'épaisseur voulue [microtome Ranvier). Il existe des microtomes à vis micrométriques, à bascule, à plan incliné (prix élevé, pour l'usage des spécialistes).

Exécution: Pour les feuilles, faire une incision dans une tige de moelle de sureau dans le sens de la tige; introduire dans la fente ainsi obtenue votre objet, avec un fil; ligaturer pour maintenir l'objet en place; placer dans le microtome, asperger d'alcool faible la moelle de sureau, faire des coupes le plus mince possible; aussitôt coupées, plonger dans l'alcool faible les feuilles, tiges, racines ayant été fixées avant de faire les coupes.

TIGES - RACINES

• Dans une tige de moelle de sureau faire e un trou au centre avec une pointe, d'un diamètre à peine plus gros que la racine; introduire en forçant légèrement la racine dans la moelle.
• Si vous avez un microtome, rouler la moelle de sureau entre les paumes de vos mains de façon à diminuer son diamètre; introduire dans le microtome; asperger abondamment avec de l'eau légèrement alcoolisée. La moelle de sureau va gonfler et sera solidement fixée. Tourner la vis, couper avec un rasoir à face plane. A défaut de microtome, faire les coupes à main levée, ne retenir que les plus minces.
• Aussitôt coupées, tremper vos coupes dans l'alcool.

POLARISATION

L'appareil de polarisation est constitué par deux lames de Polaroïd, l'une, appelée polariseur, est placée sous le condensateur, l'autre, appelée analyseur, est placée sur l'oculaire. On peut à la rigueur placer le polariseur entre la platine et la préparation. En faisant tourner à angle droit l'un des Polaroïds, on obtient d'une part un maximum de lumière, d'autre part l'extinction complète. Si l'objet examiné polarise la lumière, on obtiendra différents coloris suivant la rotation de l'analyseur, on examinera avec beaucoup d'intérêt les cris- taux, les amidons, etc.